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上海紀寧實業有限公司 >>> 新聞動態

蛋白質與國產ELISA試劑盒相互作用的研究

點擊次數:60 發布時間:2019-04-10
 

國產ELISA試劑盒與蛋白質是生命活動的執行者,細胞內的生理變化都是通過蛋白質來實現的。但是生命活動中各項功能和行為不是由單一的蛋白質來完成的,需要蛋白質與蛋白質,蛋白質與核酸之間的相互作用來實現的。蛋白-蛋白互作網絡與轉錄調控網絡對調控細胞及其信號有重要意義。于是對于蛋白之間相互作用的研究也變的很重要,關于研究方法也是層出不窮。
 
在我們實驗研究的過程中主要用到以下幾種技術:
1.酵母雙雜交(Y2H)
2.Pull-down技術
3.免疫共沉淀技術(Co-IP)
4.亞細胞共定位技術
5.噬菌體展示技術(PDT)
6.熒光共振能量轉移技術(FRET)
7.雙分子熒光互補技術(BIFC)

其中實驗室比較常用的研究方法主要是前三種。這里對酵母雙雜交技術略作介紹和評述。

原理:
酵母雙雜交系統由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的轉錄激活因子GL4有兩個獨立的結構域 :N末端的DNA結合域(BD)和C末端的轉錄激活域(AD)。BD與DNA分子結合,AD激活下游基因的轉錄,國產ELISA試劑盒只有兩者在空間上充分接近才能激活下游基因的轉錄。于是將要研究的兩個蛋白分別與BD和AD融合,如果兩個蛋白有相互作用則AD和BD在空間上會接近進而激活下游報告基因的轉錄。

操作步驟:
(1)首先構建已知蛋白的cDNA序列為誘餌,與DNA結合域融合(2)將待篩選的蛋白的cDNA序列與轉錄激活域融合,構建成文庫質粒(3)將這兩個質粒共轉化到酵母細胞中(4)通過檢測下游報告基因的表達篩選或確認蛋白相互作用。

優缺點:
優點:是可以在文庫中可以高通量篩選與目的蛋白相互作用的蛋白缺點:是假陽性多,還需要其他方法相互印證,國產ELISA試劑盒不適用于所有的蛋白

 
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