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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

分享ELISA實驗過程中各種樣本不同的處理方法

點擊次數:86 發布時間:2019-04-18

ELISA試驗過程中各種樣本不同的處理辦法

在搜集樣本前都必須有一個完好的方案,必須清楚要檢測的成份是否滿足穩定。對搜集后當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。關于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃備用,有條件的,zui好-70℃凍存備用。標本應防止重復凍融。 液體類標本: 包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培育上清等。
1. 血清:室溫血液天然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存     過程中如出現沉積,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘     左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管搜集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如有沉積    構成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培育上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心    搜集上清。
5. 培育細胞:檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左      右。通過重復凍融或參加安排蛋白萃取試劑,以使細胞損壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
6. 安排標本:切開標本后,稱取分量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融    化后仍然保持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS(PH7.4),或安排蛋白萃取試劑,用手藝或勻漿器    將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。分裝后一份待檢測,其他冷     凍備用。
7. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行試驗。若不能馬上進
    行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應防止重復凍融.
8. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3按捺辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 
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