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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

ELISA試驗操作中留意事項總結

點擊次數:103 發布時間:2018-12-05

因為 ELISA(酶聯免疫試驗)具有靈敏度較高、特異性好的特色,在科研范疇遭到廣泛喜愛。雖然洗板僅僅ELISA試劑盒試驗重要環節中的一個,但作為專業的洗板機生產廠家,我們有必要對影響ELISA試驗成果各要素有一定的知道。的試劑 ,良好的儀器和正確的操作是確保ELISA 檢測成果牢靠的必要條件。如不留意,就易呈現白板、花板、色弱和假陽性等現象。尤其是花板現象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內質控孔成果正常,而標本孔的OD值卻顯著偏高)是各個廠家洗板機調試中常常遇到的問題。現將ELISA試驗操作中留意事項總結如下,以期給大家帶來一些啟發。

標本及收集、貯運要素
嚴峻溶血 ,以 HRP 為符號的ELISA 測定中,殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色形成假陽性; 混有紅細胞的血清 易沉積或附著在聚乙烯孔內不易洗凈;如有 細菌污染 ,菌體中或許含有內源性HRP,也會發生假陽性反應; 標本凝結不全 ,有時為了爭取時刻快速檢測,常在血液還未開端凝結時即強行離心別離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性成果; 采血試管洗刷不徹底 、重復運用易穿插污染; 塑料試管能吸附抗原物質 ,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降形成假陰性。
?
血清標本宜在新鮮時檢測,嚴峻溶血標本禁用。一般說來,在 5 天內測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時刻過長導致血清IgG 聚合,使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免發生氣泡。混濁或有沉積的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。重復凍融會使 抗體 效價跌落,所以測 抗體 的血清標本如需保存作屢次檢測,宜少數分裝冰存;應該運用一次性玻璃試管或真空管采血管;并運用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會添加OD值,或許與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶符號物不易洗脫有關;EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性;血液標本收集后有必要使其充分凝結后再別離血清,或標本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中加入恰當的促凝劑。

 
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